在分子诊断、食品检测等实验室中，长期PCR产生的气溶胶污染，引起qPCR、PCR假阳性结果，十分令人困扰。气溶胶核酸污染具有扩散性、难清除、长时间悬浮特点，实验中，可选用UNG酶来消除气溶胶核酸污染，以获得准确可靠的结果。

一、UNG酶的作用机制

UNG酶的作用原理是选择性水解断裂含有dU的双链或单链DNA中的尿嘧啶糖苷键，形成的有缺失碱基的DNA链，在碱性介质以及高温下会进一步水解断裂，从而被消除。

图1 热敏UNG清除气溶胶污染原理

UNG酶分为普通型和热敏型UNG酶，适用于多种场景PCR气溶胶污染控制。其中，热敏型UNG更适合一步法RT-PCR和LAMP。

二、为何选择百力格热敏UNG？

百力格热敏UNG (BioZues® Heat-labile UNG)，是RT-qPCR不可或缺的帮手，气溶胶污染物清除能力强，防污染效果好。在室温下即可起作用，50℃、2min即可快速失活，对Ct值影响小，不影响测试灵敏度。

1. 清除污染效果优异

以含"U" PCR产物为模板，分别加入1 U不同厂商的热敏UNG，进行qPCR反应。

图2 百力格 (BLG) 和厂商A/B/C热敏UNG去污染测试

上图结果显示，相较于厂商A/B/C，百力格热敏UNG的Ct值明显靠后，即含"U" PCR产物清除更彻底，去污染效果更优。

2. 对Ct值影响小

以乙流样本为模板进行RT-qPCR。对照组不加UNG酶，实验组分别加入各厂商的热敏UNG反应，计算ΔCt = Ct值 (加UNG) - Ct值 (不加UNG)，ΔCt值越小说明加入的UNG对Ct值影响越小。

图3 热敏UNG对RNA样本检测扩增曲线及Ct值的影响 (扩增曲线图中蓝色-百力格, 红色-厂商A, 绿色-厂商B, 玫红-厂商C)

上图结果显示，加入UNG前后百力格ΔCt 最小，表明百力格UNG酶对Ct值影响最小。

3.热失活彻底

将百力格和进口厂家热敏UNG进行失活测试。对照组不加UNG酶，实验组分别加入等量的热处理 (55°C, 5min) 和不进行任何处理的热敏UNG酶，相同程序反应，计算ΔCt = Ct值 (实验组) - Ct值 (对照组)，ΔCt值越小，说明热失活越彻底，对Ct值影响越小。

图4 热敏UNG的清除效果及对Ct值的影响

不处理组结果显示，加热敏UNG的反应均没有Ct值，说明两种热敏UNG均有很好的去污染效果。

从热处理组结果可以看出，百力格ΔCt值明显小于进口厂家，表明百力格热敏UNG热失活更彻底，对Ct值影响更小。

4. 无DNA内切酶和外切酶残留

取5U BioZues® Heat-labile UNG与质粒DNA 37°C孵育，跑琼脂糖凝胶电泳观察DNA条带变化，验证百力格热敏UNG无DNA内切酶和外切酶残留。

图5  DNA内切酶 (左) 及DNA外切酶 (右) 残留检测

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