如果转染效率没有问题，阳性对照为阴性，说明：
1.转染实验和操作没有问题。
2.RT-PCR与WB有结果，RT-PCR如果没有被污染，应该过程没有问题。
说明更多的问题出现在siRNA本身上。
RNAi相关
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1.做RNAi相关实验，转染后收集细胞提RNA做RT-PCR,但一个都没有起到干扰效果，阳性对照是干扰的GAPDH也没有出现干扰效果，请问怎么办?
更新时间：2025-10-24
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2.rAPP腺苷化修饰的用途是什么？
更新时间：2025-10-31
小RNA（small RNA）文库构建过程中，避免RNA分子的自连，减少文库中RNA嵌合体的存在。
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3.RNAi 实验为何以 mRNA 水平检测为主？检测蛋白和其他功能为辅？
更新时间：2025-10-24
由于 siRNA/miRNA mimics/inhibitor/ASO 直接作用于 RNA，所以首先需要检测 mRNA 变化水平。通常 mRNA 下调会导致其编码蛋白下调， 但是如果出现 mRNA 下降水平与蛋白下降水平不一致的情况， 其可能原因有：
1） 与选择的检测时间有关。可能 mRNA 下调后，目的蛋白还未达到明显变化水平，多数都会出现滞后现象， 但是个别也有提前变化。建议检测时间
点至少有 2 个以上，以便选择明显变化的时间点；
2）蛋白变化水平可能维持在一个固定区间，不会随 RNA 变化出现明显改变；
3）个别抗体存在特异性问题，抗体经过敲除实验验证可抗性可信度较高；
4）细胞功能判断干扰效果的影响因素较为复杂，个别基因变化不一定引起细胞功能表型明显变化，并且细胞的代偿机制会起到协同互补作用；
5） miRNA 大多作用于基因 3’ -UTR 区域，可能会阻止蛋白翻译， 但是不一定会降解 mRNA。
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4.目的基因干扰效果判断标准
更新时间：2025-10-24
1）对于非套餐产品，我们不能保证干扰效果，但是可以通过质谱鉴定保证序列合成准确性；
2） 对于套餐产品，转染效率可以达到 80%以上，我们保证套餐中至少 1 个干扰靶点， mRNA 干扰效果能达到 70%左右。 个别情况干扰效果若＜70%， 但是统计学差异可以达到显著性差异的（p<0.05）， 其干扰效果也是有意义的；
3） 如果细胞的蛋白或其他表型及功能有显著变化，一般可通过优化转染效率，优化实验体系，检测不同时间点等方法来获取最佳干扰效果。
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5.细胞转染后出现大量死亡现象
更新时间：2025-10-24
1） 细胞状态欠佳，或可能有污染物如支原体， 建议更换细胞或调整细胞生长状态， 一般处于良好生长状态的细胞对转染试剂有更好的耐受性
2） siRNA 等 oligo 或者转染试剂浓度过高或转染试剂毒性较大， 需更换转染试剂
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6.siRNA/miRNA mimics/inhibitor/ASO 细胞转染效率低
更新时间：2025-10-24
需要考虑如下几个原因：
1） siRNA 等 RNA oligo 纯度太低；
2） RNA 酶污染，建议使用经 DEPC 处理过的或无 RNA 酶的耗材和试剂； 3） 转染试剂质量不高或形成复合物的过程操作不当；
4） 有些转染试剂的转染效率易受血清影响，配制混合物时，不能含有血清；
5） 脂质体转染试剂保存不当；
6） 观察荧光淬灭或荧光设备有问题，如观察荧光波段不当或观察时间太久，建议 4-6 小时及时换液观察。
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7.UHP-siRNA化学修饰即用型套餐（1/3或2/5）特点优势？
更新时间：2025-10-24
UHP-siRNA化学修饰即用型套餐应用场景：针对目标靶基因设计筛选有效siRNA靶点，为小核酸药物开发或基因功能研究提供有效工具原料。
产品优势：
1. 提高siRNA其特异性、稳定性、降低其免疫原性；可发掘出功效性更好的干扰靶点；
2. 该产品套餐含对照，转染试剂，使用便捷，比单独购买相关组分成本节约30%以上
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8.siRNA转染细胞铺板密度为什么重要？
更新时间：2025-10-24
成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总的细胞数量就很重要，一般细胞数量较少时转染效率高，一些试剂由于本身毒性的影响，太低的细胞数量时毒性明显，所以会要求较高的细胞密度；所以根据转染试剂毒性以及经验选择合适的细胞密度是试验成功的关键。
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9.动物实验中转染试剂和核酸用量？
更新时间：2025-10-24
转染RNA和DNA的剂量有差别，一般来说，RNA尾静脉注射成年小鼠，每只每次需要100ug核酸和50ul转染试剂。局部注射的剂量会小很多，大约总注射量的1/8为转染试剂。
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10.溶解 siRNA 应该用什么溶剂？储存条件如何？
更新时间：2025-10-24
溶剂要求：必须使用无核酸酶水或DEPC水溶解冻干粉，避免使用普通蒸馏水，否则会导致降解。
未溶解冻干粉：-20°C 或 -80°C保存，室温运输后需离心使粉末沉底。
溶解后短期分装保存于 -20°C（非自动除霜冰箱）。长期：-80°C 保存，避免反复冻融。
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11.相同的 siRNA/miRNA mimics/inhibitor/ASO，在不同细胞中是否有同样的干扰效果
更新时间：2025-10-24
由于不同细胞的基因表达水平、 转染效率以及细胞状态等都可能存在差异， 导致 siRNA 等靶点的干扰效率存在差异，所以不同细胞的干扰效果不能保证一致， 但是只要有一株细胞检测确认干扰效果， 则可以证明设计合成的 siRNA 有效。
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12.小核酸药物引发免疫反应如何规避？
更新时间：2025-10-24
1. 修饰核苷酸：2′-O-甲基、2′-氟代修饰避免 TLR 识别。
2. 递送系统优化：LNP 表面 PEG 化减少非特异性免疫细胞吸附。
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13.细胞的转染效率是否与 siRNA/miRNA mimics/inhibitor/ASO 等序列相关？
更新时间：2025-10-24
通常由于 siRNA 等小核酸 oligo 序列大小非常接近，转染效率高低与 siRNA 的序列并没有直接关系， 但是有些修饰如胆固醇可以提高转染效率。转染效率高低的关键取决于细胞本身及转染试剂、转染方法等。
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14.ASO 细胞摄取效率低怎么办？
更新时间：2025-10-24
化学修饰：硫代磷酸酯（PS）修饰增强亲脂性，提高被动扩散效率。靶向递送：偶联配体（如 GalNAc 肝靶向、叶酸受体靶向）提升细胞特异性摄取。
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15.如何减少 siRNA 的脱靶效应（Off-target Effects）？
更新时间：2025-10-24
使用化学修饰 siRNA（如 2′-O-甲基、LNA 修饰）减少与非靶标 mRNA 结合；选择多靶点 siRNA 库（Pooled siRNA）或验证至少 2 条独立序列。免疫原性控制：避免含“GUCCUUCAA”等免疫刺激序列，采用硫代磷酸酯（PS）骨架修饰。
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16.siRNA 转染效率低，细胞方面如何优化？
更新时间：2025-10-24
细胞状态：细胞密度需 60–80% 汇合度，过高（>90%）或状态差显著降低效率。
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17.ASO 和 miRNA 的储存是否与 siRNA 相同
更新时间：2025-10-24
ASO：冻干粉需 -20°C 保存，溶解后建议分装存于 -80°C。ASO 对核酸酶敏感，溶解需用无核酸酶水或DEPC水。
miRNA（如agomir/antagomir）：与 siRNA 类似，但需注意化学修饰（如 2′-O-甲基修饰）稳定性更高，可室温保存数周，但长期仍需 -80°C保存；天然 miRNA 易降解，溶解后立即使用或 -80°C 分装。
